Chimie

Méthodes de génie génétique

Méthodes de génie génétique


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Détermination de la concentration et de la pureté des acides nucléiques

La concentration d'une solution d'ADN ou d'ARN est généralement déterminée par photométrie en laboratoire à une longueur d'onde de 260 nm dans une cuvette en quartz. La concentration peut être calculée à partir de l'absorbance de la solution en utilisant le rapport suivant :

OD260 = 1 correspond à 50 µg/mL d'ADN double brin (ds), 40 µg/mL d'ARN, 33 µg/mL d'ADN simple brin et environ 20 µg/mL pour les oligonucléotides. Ceci s'applique aux acides nucléiques à pH 7,0 ; la mesure doit donc être effectuée dans un tampon à faible concentration en sel (par exemple un Tris1)Tampon à pH 7,0).

Contamination de la solution d'acide nucléique

Selon la méthode d'isolement de l'ADN utilisée, les solutions d'acides nucléiques peuvent être contaminées par de l'ARN, des protéines ou des résidus de phénol. Alors que la contamination par l'ARN ou le phénol (absorption maximale à 270-275 nm) ne peut pas être détectée par spectrométrie, le rapport entre l'absorption d'acide nucléique et l'absorption de protéine fournit des informations sur la pureté d'une solution d'acide nucléique.

Le maximum d'absorption pour les protéines basé sur l'absorption des résidus d'acides aminés aromatiques est de 280 nm. Le rapport de la DO260 à l'OD280 montre à quel point une solution d'ADN est encore contaminée par de l'alcool et des résidus de protéines. Un rapport de 1,8 parle d'un isolement d'ADN pur, un rapport de 2,0 pour un isolement d'ARN pur. Si la solution d'acide nucléique est contaminée par des protéines ou du phénol, la valeur est nettement inférieure. Le quotient DO230 à l'OD260 déterminé, qui devrait idéalement être de 0,45 et est un indicateur d'une contamination supplémentaire, par exemple avec des polysaccharides.

Autres procédures

L'analyse spectrométrique n'est pas adaptée pour déterminer la teneur en ADN d'un échantillon contaminé par de l'ARN. Dans ces cas, l'échantillon d'acide nucléique dans le gel d'agarose peut être séparé avec un échantillon de référence d'une taille aussi similaire que possible et le gel peut être coloré avec du bromure d'éthidium une fois l'analyse terminée. Le bromure d'éthidium s'intercale dans l'ADN et devient fluorescent lorsqu'il est exposé à la lumière UV. En mesurant la fluorescence avec des scanners ou des systèmes d'imagerie, la concentration en ADN peut désormais être quantifiée.


Vidéo: Le génie génétique pour les SVT et préparation médecine (Juillet 2022).


Commentaires:

  1. Faelen

    Quel succès!

  2. Tannere

    Parfaitement)))))))

  3. Bud

    Je regrette de ne pouvoir participer à la discussion maintenant. Très peu d'informations. Mais le sujet m'intéresse beaucoup.

  4. Readman

    Il me semble que cela a déjà été discuté.

  5. Jemal

    À mon avis, vous commettez une erreur. Discutons-en. Écrivez-moi dans PM, nous communiquerons.



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