Chimie

Méthodes de génie génétique

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Importance des endonucléases de restriction

Avec l'aide d'endonucléases de restriction, vous pouvez in vitro découper et isoler sélectivement des sections d'ADN du contexte des génomes géants. L'énorme importance des enzymes de restriction pour le développement du génie génétique repose sur cette propriété.

1. La cartographie des restrictions

Avant que les séquenceurs automatiques ne soient disponibles dans pratiquement tous les laboratoires capables de séquencer un plasmide en peu de temps, la caractérisation de plasmides inconnus commençait souvent par la préparation d'une carte de restriction. Dans ce processus, les interfaces d'un certain nombre d'endonucléases de restriction sélectionnées sur le plasmide sont cartographiés par des digestions simples ou multiples. Même aujourd'hui, la cartographie de restriction est toujours une méthode simple et rapide, par exemple pour vérifier l'orientation d'un fragment cloné.

2. Le clonage

Les endonucléases de restriction sont également des outils essentiels pour le clonage de sections d'ADN. Les extrémités complémentaires, simple brin (extrémités collantes) des fragments de restriction d'ADN peuvent s'apparier les uns avec les autres, ce qui in vitro peuvent être liés les uns aux autres par la ligase. Pour les fragments de restriction avec émousse le stockage ensemble est également possible, mais nettement moins efficace. De cette façon, des fragments d'ADN d'origines différentes peuvent être liés pour former de nouvelles molécules d'ADN.


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